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鸡抗猪产毒素性大肠杆菌卵黄抗体的应用

 


 

摘要:产毒素性大肠杆菌与仔猪腹泻的致病过程密切相关。卵黄抗体具有价格便宜、制作简单等优点,能降低腹泻的发生率和严重程度,是防治仔猪大肠杆茵性腹泻的一种新方法。本文就国内外鸡抗猪产肠毒素性大肠杆茵卵黄抗体的应用作了简要介绍。

关键词:产肠毒素性大肠杆茵;仔猪;腹泻;卵黄抗体

Application of Chicken Egg-Yolk Antibody Against Enterotoxigenic Escherichia Coil

 

AbstractEnterotoxigenic escherichia coil(ETEC)related with diarrhoea of early-weaned piglets.Chicken egg-yolk antibody was cheaper to produce in large amount,it could reduce the incidence and seriousness of the diarrhea.It was a new method using chicken egg-yolk antibody to prevent and cure piglets’diarrhoea.This paper made a simple review in application of chicken egg-yolk antibody against ETEC around the world.

Key wordsenterotoxigenic escherichia coil;piglets;diarrhea;chicken egg-yolk antibody

仔猪大肠杆菌性腹泻主要是由产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)起的仔猪的一种常见病,严重影响养猪业的发展。目前对本病的防治除加强综合性预防措施以外,生产上多采用ETEC的多价疫苗和基因工程苗免疫母猪,提高初乳中的抗体水平,以防治哺乳仔猪的产肠毒素大肠杆菌性腹泻。然而母乳中的抗体保护作用是有限的、暂时的,在断奶后短期内将消失。另外应用高免血清治疗该病也是一种极为有效的方法。但血清价格昂贵,且易导致过敏反应,限制了它的应用。因此应用抗ETEC卵黄抗体治疗和预防新生仔猪和断奶仔猪腹泻的研究在国内外一直倍受瞩目。

l  卵黄抗体及其特性

1.1 卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体卵黄抗体的研究始于19世纪末至20世纪初l889年,Klemperer发现了卵黄中富含抗体;1934年,Jukes的试验证明母鸡血清中的抗体可以转移到卵黄中,从而为雏鸡提供被动免疫保护;Patterson等试验证实,相对别的血浆蛋白,IgG能被选择性地转运到卵泡中。1969年,LeslieClem将这种抗体命名为 IgY。存在于禽卵黄中的免疫球蛋白主要是IgYIgMIgA IgD的含量极少。鸡IgY在功能上相当于哺乳动物的IgG

1.2 卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋白,在贮存、生产、加工以及摄食、消化过程中 ,对保证抗体活性的稳定性是非常关键的。王炯等[1]的试验表明,鸡IgY具有较好的稳定性,耐酸、耐碱、耐热。李学伍等[2]将抗仔猪大肠杆菌卵黄抗体制成喷雾干燥粉,除了黏附在管壁上的抗体滴度稍有下降外,正常喷出的干粉抗体滴度与卵黄液一致。Jin[3]的体外试验表明,经喷雾干燥的含抗K88菌毛抗体的鸡卵黄粉能有效阻碍K88-ETEC与猪小肠黏膜 的黏附。卵黄抗体较易保存 Larsson[4]认为在 4条件下存放5年或室温条件下存放6个月对抗体活性无明显影响;王炯等[1]报道,抗脊髓灰质炎病毒IgY25室温条件下保存半年,活性无明显变化。

1.3 卵黄中抗体浓度能长期维持在相当于甚至超过血清抗体浓度的水平上[4-5]1只高产蛋鸡(平均每周产蛋 56枚,每只蛋中约含抗体100150[4])所产蛋中的抗体量相当于90100mL血清或 180200mL血液。例如1只兔子1个月可提取IgG200mL,而1只蛋鸡1个月从蛋中可提取2000mL以上。此外,在实际生产中,动物的采血不仅对动物本身是极大的应激,而且费时、费工,大规模生产是不切实际的,而利用蛋鸡生产抗体要方便得多。

2 鸡抗猪产肠毒素性大肠杆菌卵黄抗体的制备与作用机制

2.1 致病性大肠杆菌主要有产肠毒素性大肠杆菌 (ETEC),肠致病性大肠杆菌 (EPEC),肠出血性大肠杆菌 (ELEC)和肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)。其中ETEC是造成新生仔猪和断奶仔猪腹泻的最主要的致病菌之一。ETEC本身具备两个致病因素:一是宿主特异性菌毛(黏附素,黏附因子,定植因子),通过菌体粘着于小肠的上皮细胞上,以抵抗肠道蠕动和肠内容物的冲刷作用,从而使细菌在定居部位大量繁殖;二是肠毒素,即耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)ST具有抗原性,LT仅有弱抗原性。

2.2黏附性菌毛的成分为蛋白质,具有良好的抗原性,给机体免疫后能产生相应的抗体。鸡卵黄抗体的制备,可用大肠杆菌菌苗或宿主特异性K88K99987PF41FI8菌毛蛋白免疫产蛋鸡[6-7],然后分离收集蛋黄或进一步提纯卵黄抗体。卵黄液或提纯的卵黄抗体可冻干或喷雾干燥保存,抗体活性不受损失。口服卵黄抗体与初乳中免疫球蛋白在肠道中有相似的抗 ETEC作用,其机制是:抗体与特异性菌毛抗原结合阻止了大肠杆菌的宿主特菌毛与小肠黏膜上皮细胞的特异性受体结合,使大肠杆菌无法在仔猪小肠黏膜上附着,病原性大肠杆菌无法增殖,或者使之变为非病原性细菌而排除体外,从而防止了腹泻的发生。

3 卵黄抗体在仔猪中的应用

3.1 卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌性腹泻的效果

Yokoyama[7]首次用卵黄抗体控制仔猪大肠杆菌病,他们将提纯的 ETEC宿主特异性菌毛K88K99987P制成菌毛蛋白疫苗,胸部肌肉注射免疫产蛋母鸡,抗体水平达到高效价后,收集鸡蛋,分离和喷雾干燥卵黄抗体,对感染不同ETEC菌株的初生未采食的哺乳仔猪进行卵黄抗体治疗。结果显示,所有仔猪接受不同菌株感染后l2h内均发生腹泻;用效价为6252500的抗体治疗,仔猪全部存活,而对照组仔猪死亡率超过80%。胡子信等[8] K88K99987P三价灭活苗试制了4批鸡抗猪 ETEC卵黄抗体,在北京近郊 5个县 9个猪场近900头仔猪上进行防治试验,对于确诊为大肠杆菌引起的仔猪黄痢、白痢其有效率为 100%。肖驰等[9]分别制备了抗 K88K99987PF41菌毛抗原和菌体抗原的卵黄抗体,分别给初生仔猪投服后,7日龄的仔猪腹泻率由47.7%下降至9.4%和l8.6%,8l2日龄的仔猪腹泻率也比对照组下降了9.5%和 l2.1%。结果表明,两种卵黄抗体都有效,但菌毛抗原的卵黄抗体效果更好。试验还显示卵黄抗体对仔猪黄痢的治愈率高于庆大霉素、土霉素和痢特灵。李学伍等[2]将仔猪大肠杆菌卵黄抗体制成干粉,其抗体效价不变,试验表明胃液对干粉抗体影响不大,该卵黄抗体粉对发病仔猪的治愈率可高达97.7%,比药物治疗的治愈率高21.2%。Marquartl[10]研究表明,用K88+ETEC诱导3日龄仔猪腹泻,再用鸡卵黄抗体治疗,24h后被治愈,而用未免疫鸡的蛋黄粉处理后,仔猪继续腹泻,其中 62.5%因严重腹泻而死亡。Yokoyama[11]在饲粮中添加抗F18菌毛卵黄抗体对感染 F18+ETEC的断乳仔猪获得了良好的保护作用,降低了腹泻的发生率和严重程度。

3.2 提高早期断奶仔猪的生产性能

王建明等[12]21日龄断奶仔猪日粮中添加0.2%卵黄抗体,结果表明第一周的平均 日增重、平均耗料量和饲料报酬分别提高76.8%、14.5%和35.1%,全期(试验期14d)的平均日增重、平均耗料量和饲料报酬也有同样的趋势,使用卵黄抗体添加剂的试验组比对照组分别提高23.7%、11.4%和10.0%,说明了卵黄抗体添加剂明显促进断奶仔猪的增重和饲料转化。在试验期间,试验组仔猪精神状态比对照组活跃,肤色红润,采食量高。而对照组仔猪在断奶第一周整体生长性能和表现都较差,说明了卵黄抗体添加剂对于降低断奶应激有很好的效果,并且观察到卵黄抗体添加剂对早期断奶仔猪的外观表现也有改善作用。陈鲁勇等[13]选用脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体防治腹泻卵黄抗体、CCK卵黄抗体等组成的复合抗体作为21日龄断奶仔猪饲料的添加剂,设添加与不添加两个试验组。结果表明,2135日龄阶段,试验组比对照组平均日增重提高了7.14(P<0.05),差异显著说明复合卵黄抗体粉剂有促进断奶仔猪生长的作用试验组的料重比比对照组下降 6.0%。Marquardt[14]的试验表明,21日龄断奶仔猪使用卵黄抗体添加剂可以有效地降低仔猪下痢的头数,减少死亡率,提高增重水平 (其中对照组减重36.2g,试验组增重90.6g)。其他研究者也同样证实卵黄抗体添加剂的促生长效果[15-16]

4 卵黄抗体的应用前景

卵黄抗体成本低、使用方便、保存容易,可以经口服而在小肠内局部发挥作用,不存在药物残留和耐药性的问题;而且卵黄抗体液本身也是蛋白质,有促生长作用。如将鸡卵黄抗体用于饲料添加剂,既可用于疾病的防治,又能促进生长发育,而且还能克服药物治疗的某些缺点,具有很大的开发前景。不同地区引起仔猪腹泻的ETEC菌毛抗原不完全相同,只有用与这些菌毛抗原相应的抗体才能起到治疗作用,因此在鸡卵黄抗体的应用上有必要进一步探讨和研究如何提高抗体的防治效果和降低生产成本的问题。卵黄抗体可能带有经蛋垂直传播疫病的病原,如减蛋综合征、禽白血病、禽沙门氏菌病、鸡慢性呼吸道病等,对养禽业存在潜在的威胁。此外,卵黄抗体粉是高蛋白物质,营养丰富,可能已带菌,或易于生产过程中污染细菌。同时不论何种卵黄抗体对相应疫病的早期感染都有很好的疗效 ,但当病情严重时.其效果不佳。卵黄抗体使用后一般 7-10d保护率为 100%,14d后保护率降为40%。说明卵黄抗体在动物体内的半衰期短,仅适于紧急预防和治疗。此外,生产卵黄抗体没有统一的质量标准可执行,没有规范的操作规程,没有用于监测的质量标准,因此卵黄抗体的应用是一个科学论证和规范的过程  

 

 

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