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多糖复合物对小鼠免疫功能的影响
作者:   时间:2012-10-25

 


 廉新慧 谷巍 刘凤芝
(山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东 泰安 271000)

  摘要:本试验选用昆明种小鼠160只,分为四个组,每组40只,对照组灌胃1ml生理盐水,试验分为高、中、低剂量组,分别按140mg多糖/kg体重、70 mg多糖/kg体重、35 mg多糖/kg体重添加,自由采食,连续30d。结果表明:高、中、低剂量组均能提高小鼠的免疫能力,并且随着添加量和添加天数的增加,这种增加作用越明显。
  关键词:黄芪多糖;酵母胞壁多糖;虫草菌丝体多糖;灵芝菌丝体多糖;免疫;抗应激
 
  Effect of Polysaccharide Compound on Immunological Function in Mice Lian Xinhui Gu Wei Liu Fengzhi
(Bora Lee Shandong to bio-engineering Co., Ltd., Tai'an, Shandong, 271000)
Abstract: In this test Kunming mice were 160, divided into four groups (n = 40), the control group was given 1ml normal saline, the test is divided into high, medium and low dose groups, respectively, according to 140mg/kg 70mg / kg, 35mg/kg add, ad libitum, continuous 30d. The results showed that: high, medium and low dose group can improve the immunity of mice and anti-stress, and increase with the addition and add the number of days, this, the increase in the role of the more obvious.
  Key Word:APS; yeast cell wall polysaccharides; Cordyceps polysaccharide; mycelia of Ganoderma lucidum polysaccharides; immune; anti-stress
 

  关于多糖的研究现已成为一个热门课题。近年来的研究发现生物活性多糖可参与细胞的各种生命调节,激活免疫细胞,抗菌、抗病毒、抗肿瘤,提高机体免疫功能,是一种有效的机体免疫促进调节剂,对人体的健康有着非常大的作用,因而越来越引起学术界的关注。所以研制生物活性多糖免疫调节剂是生物医药发展的一个重要方面。迄今为止,己有300多种活性多糖从天然产物中被分离提取出来。但这些被分离提取出的多糖多为植物多糖,由于微生物多糖除具有与植物活性多糖类似的结构、组成成分及生物功能外,还具有生产周期短、生产不受季节与地理条件及病虫害限制、无毒及不污染环境等优点。国内外文献中,对酵母胞壁多糖、中药多糖、真菌多糖的研究比较多,但对这几种多糖效果的比较以及复配的效果很少有报道。我们把这几种多糖复配起来,是为了获得具有多种活性的复合多糖, 从而实现多糖间的互补性和协同性。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试菌种
  产朊假丝酵母,蛹虫草:由宝来利来生物研究院提供。
1.1.2实验动物清洁级纯昆明种小鼠,体重18g±2g。雄性,购自泰邦生物工程有限公司实验动物中心。
1.2方法
1.2.1产朊假丝酵母培养基
  斜面培养基 :葡萄糖2%,酵母膏0.5%,蛋白胨1%,琼脂1.6%,水,自然 pH。 种子培养基和发酵培养基:不加琼脂,其余同上。
1.2.2酵母菌的发酵培养
  取出于4℃保藏的菌种,接于斜面培养基中,在30℃下培养 48h,进行活化。将已活化的菌种,接于已装有种子培养基的三角瓶中于30℃、180r/min摇床培养48h,进行种子的扩大。将培养液离心,收集菌泥,干燥,称重,计算生物量。
1.2.3酵母胞壁多糖的提取工序
  酵母溶解,冻融,超声波破碎[1]。
1.2.4蛹虫草和灵芝的培养
  培养方法与酵母菌类似,培养基为土豆20%,葡萄糖2%,磷酸氢二钾0.3%,硫酸镁0.15%,维生素B15~10mg/L,pH 6.0,虫草25℃、灵芝28℃培养48h,培养液待用。
1.2.5黄芪多糖的制备
  用水煎法生产制备[2] 。
1.2.6多糖含量的测定
  用苯酚一硫酸法测多糖含量[3]。
1.2.7动物分组及给药
  将小鼠按体重随机分为4组。每组40只,雌雄各半[4]。四种多糖等量复配,分为四个剂量组,Ⅰ组:低剂量组(35 mg多糖/kg体重),Ⅱ组:中剂量组(70 mg多糖/kg体重),Ⅲ组:高剂量组(140 mg多糖/kg体重[5]),CK组:空白对照组(生理盐水)。根据体重按设定的剂量每天定时灌胃1次,自由饮食饮水[6],共30天。
2.2.8试验检测指标
1.2.8.1小鼠生长状况及增重率的检测
  观察体毛、神志、饮食及活动情况。实验开始前及实验开始后每隔10天测一次小鼠体重。
1.2.8.2小鼠免疫器官指数的测定
  分别在实验开始后11d、21d、31d,称重后处死小鼠,取出胸腺和脾脏分别称湿重,然后计算胸腺和脾脏指数。胸腺或脾脏指数=胸腺重或脾重(mg)/体重(g)。
1.2.8.3小鼠血细胞数量的检测
  分别在实验开始后11d、21d、31d小鼠尾静脉采血20µL,用血球计数仪计血细胞数。
1.2.8.4小鼠脾细胞抗体生成细胞含量的检测
  于实验开始后第5d,每只鼠腹腔注射1ml 20% SRBC进行免疫,对照组注射等量的灭菌生理盐水。分别实验开始后第11d,21d,31d,脱颈处死小鼠,立即剖取脾脏,用Hank’s液将脾细胞悬液配成5×106/ml。取脾细胞混悬液0.5ml,加0.2%SRBC悬液和10%稀释的豚鼠血清各0.5ml,混匀,空白对照管以1ml生理盐水代替脾细胞样品,其余同反应管。
  37℃孵育1h,取上清液于分光光度计413nm比色,测溶血空斑形成情况。
1.2.9 数据处理
  各实验数据应用Minitab软件t检验法分析各组间差异。
2结果与分析
2.1黄芪多糖和真菌多糖的测定结果
表4-1 多糖的测定结果
Table 4-1 Determination of the results of the polysaccharide

 
虫草菌丝体多糖
Polysaccharides from mycelia of Cordyceps Militaris;
灵芝菌丝体多糖
Polysaccharides from mycelia of Ganoderma lucidum
酵母胞壁多糖
Yeast cell wall polysaccharides
黄芪多糖Astragalus polysaccharides
含量 (mg/ml)Content
2.3
2.3
2.0
4.0
        由表4-1可见,这四种多糖中以黄芪多糖的含量最高,但各组没有显著差异(P>0.05)
  2.2小鼠生长状况和增重率的变化
各组小鼠在实验前后进食量、进水量正常,被毛光泽、活动良好,反应敏捷,说明以不同比例复配的复合多糖对小鼠生长状况无不良影响。增重率变化见表4-2。
表4-2 小鼠增重率的变化(%)
Table 4-2 changes in the rate of weight gain in mice
10d
13.12
13.72A
14.48A
14.55A
20d
14.08
14.65
14.77
16.36A
30d
15.73
16.38A
17.49A
19.85a
      注:试验组与空白组比较,A表示差异显著(P<0.05);a表示差异极显著(P<0.01);没标表示差异不显著,下表同。
  Note: The values designated by A are significantly different from the contrast group(A ,p<0.05) and a are very significantly different from the contrast group (a ,p<0.01) . The following is same as here.
对增重率的影响,空白对照组组与各试验组比较,各试验组增重率明显高于空白组,高剂量组在饲喂到30天时差异极显著(P<0.01),中、低剂量组差异显著(P<0.05)。
2.3小鼠免疫器官指数的变化见表4-3。
表4-3 小鼠免疫器官指数的变化(mg/g)
Table 4-3 Changes in mice immune organs index
组别
Group
 
11d
21d
31d

CK

脾脏指数Spleen index
4.018±0.122
4.318±0.314
4.540±0.218
胸腺指数Thymus index
2.05±0.507
2.24±0.063
2.60±0.489
脾脏指数Spleen index
4.086±0.817
4.347±0.292
4.640±0.424
胸腺指数Thymus index
2.06±0.109
2.46±0.158A
2.89±0.130A
脾脏指数Spleen index
4.151±0.304
4.56±0.154A
4.802±0.068a
胸腺指数Thymus index
2.24±0.355A
2.68±0.286a
3.14±0.092A
脾脏指数Spleen index
4.164±0.379
4.724±0.258a
5.000±0.257a
胸腺指数Thymus index
2.28±0.721A
2.89±0.502a
3.22±0.044a
                                                对脾脏指数的影响,低剂量组与空白对照组比较,没有显著差异(P>0.05);与空白对照组比较,中剂量组在饲喂21d和31d时则是差异显著(P<0.05)和差异极显著(P<0.01);高剂量组与空白对照组比较,在饲喂21d和31d时均差异极显著(P<0.01)。
  对胸腺指数的影响,低剂量组与空白对照组比较,在饲喂21d、31d时差异显著(P>0.05),中低剂量组的胸腺指数明显高于空白对照组(P<0.05),高剂量在饲喂到21d、31d时,差异极显著(P<0.01)。
2.4小鼠血细胞数量的变化见表4-4。
表4-4小鼠血细胞数量的变化
Table 4-4 Changes in the number of blood cells in mice
组别
Group
 
11d
21d
31d

CK

白细胞数White blood cell count(10-9/L)
4.1±0.006
4.4±0.002
4.93±0.004
红细胞数Red blood cell count(10-12/L)
9.641±0.005
9.840±0.007
9.964±0.005
白细胞数White blood cell count(10-9/L)
4.13±0.006
4.92±0.004A
5.13±0.003A
红细胞数Red blood cell count(10-12/L)
9.663±0.004
9.931±0.009
10.434±0.019A
白细胞数White blood cell count(10-9/L)
4.31±0.007A
5.07±0.001a
5.26±0.005a
红细胞数Red blood cell count(10-12/L)
9.997±0.016A
10.113±0.024A
10.568±0.004a
白细胞数White blood cell count(10-9/L)
4.57±0.006a
5.33±0.005a
5.48±0.003a
红细胞数Red blood cell count(10-12/L)
10.037±0.026a
10.418±0.012a
10.689±0.018a
  对白细胞数量的影响,与空白对照组比较,低剂量组在11d时,没有显著差异(P>0.05),21d时和31d,差异显著(P<0.05);中剂量组与空白对照组相比, 11d时,差异显著(P<0.05),饲喂到21d时和31d,差异极显著(P<0.01);高剂量组与空白对照组相比,差异均极显著(P<0.01)。
  对红细胞数量的影响,与空白对照组比较,低剂量组在11d、21d没有显著差异(P>0.05),31d时,差异显著(P<0.05);中剂量组在11d、21d差异显著(P<0.05),在31d差异极显著(P<0.01);高剂量组在11d、21d、31d明显高于空白对照组,差异均极显著(P<0.01)。
2.5小鼠脾细胞抗体生成细胞含量的变化,见表4-5。
表4-5 小鼠溶血空斑形成的变化
Table 4-7 Change of hemolytic plaque formation in mice
灌胃天数Gavage days
CK(OD)
Ⅰ (OD)
Ⅱ (OD)
Ⅲ (OD)
11d
0.5016±0.0021
0.5055±0.0025A
0.5076±0.0017A
0.5121±0.0015a
21d
0.5104±0.0032
0.5118±0.0028
0.5193±0.0034a
0.5249±0.0026a
31d
0.5005±0.0041
0.5144±0.0031a
0.5241±0.0022a
0.5299±0.0035a
  对溶血空斑形成的影响,与空白对照组比较,低剂量组在11d和31d差异分别是显著(P<0.05)和极显著(P<0.01);中剂量组空白对照组相比,在11d时差异显著(P<0.05),在21d和31d时差异极显著 (P<0.01);高剂量组与空白对照组相比,差异极显著 (P<0.01)。
3讨论
3.1对小鼠生存状况及体重的影响
  多糖能够增加动物的体重,明显加快动物的生长,其机制是,当多糖提高动物的免疫功能之后,必然会增强动物对外来病原的抵抗作用,从而促进动物的生长。本实验结果也显示,三组复合多糖与对照组相比,均能提高小鼠的增重率,并且随着用药时间的延长,差异越显著。
3.2对小鼠免疫器官指数的影响
  胸腺和脾脏是动物的重要免疫器官。免疫器官的重量在一定程度上可反映免疫器官内淋巴细胞的数量,从而间接了解体内淋巴细胞总体水平对细胞免疫和体液免疫都有促进作用。当动物处于应激反应衰竭期时,胸腺、脾脏及体重也相应降低,因此测定动物体重、胸腺及脾脏重量指数也能反映机体免疫力的一方面。从本实验结果可以得出,各试验组均能增加胸腺、脾脏重量指数,尤其是试验Ⅲ组,增加极明显。
3.3对小鼠血细胞数量的影响
  白细胞数量的增加表明机体对抗外来细菌与病毒入侵的能力加强,对提高机体免疫力,改善白细胞减少症有着重要的意义。现代红细胞免疫学研究认为,红细胞有许多与免疫有关的物质,是血循环中最重要的固有免疫细胞,具有识别、黏附、浓缩、杀伤抗原、清除循环免疫复合物(CIC)的能力,参与机体免疫调控,并有完整的自我调控系统[7],因此,造血功能不足,红细胞水平下降将会影响机体免疫功能。试验组对白细胞数目的影响,与对照组比较,给药各剂量组可显著提高白细胞数目。这说明多糖可以增强机体对抗外来细菌与病毒入侵的能力,促进衰老及受损细胞的清除,从而提高机体的免疫力。对红细胞生成数量的影响,试验组明显高于对照组,且饲喂的时间越长,差异越显著。
3.5 对小鼠脾细胞抗体生成细胞含量的影响
  体液免疫机能的测定常采用直接测定其中的抗体水平实验以及溶血空斑实验(PFC)。PFC是细胞介导的溶血实验,是在体外测定抗体形成细胞数量的一种方法,溶血空斑形成数量大体可反映抗体形成细胞的数量。对溶血空斑形成的影响,各给药组与对照组比较,各给药组溶血空斑形成率明显高于对照组。
该复合多糖是中药多糖和真菌多糖的复合,具有多方面的生物活性,在免疫增强方面有协同增效作用。而且用发酵生产的微生物多糖,价格便宜,简单易得,安全、绿色,部分替代了中药多糖。在中药多糖越来越贵的情况下,复合多糖在免疫增效的同时,降低了成本,有很好的应用前景。

参考文献
[1] 吴小刚,吴周和,吴传茂.啤酒提取工艺条件的研究[J].饲料工业,2006,27(9):27~29.
[2] 王志俊.对当归、淫羊藿和黄芪的提取方法的研究[J]. 海峡药学,2010,22(3):82~83.
[3]张青,张天民.苯酚一硫酸比色法测定多糖含量[J].山东食品科技.2004,7(1):117.
[4] 邬利娅•伊明,帕丽达•阿不力孜,白丽,等.阿里红多糖对小鼠免疫功能的影响田[J].新疆医科大学学报,2003,26(6):563-565.
[5] 龚晓,健季晖,卢顺等.人工虫草多糖对小鼠免疫功能的响[J]. 中国药科大学学报,2000,31(1):53~55.
[6]杨铁虹,贾敏,梅其炳.当归多糖对小鼠免疫功能的调节作用[J].中成药,2005,27(5):563-566.
[7]郭峰,钱宝华,张乐之. 现代红细胞免疫学[M]. 上海:第二军医大学出版社,2002:24~25.

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